多肽及核酸類藥物
多肽類藥物和核酸類藥物憑借其獨特的藥理作用和廣闊的市場前景，成為當前醫藥市場的兩大熱門細分領域。隨著我國鼓勵創新藥研發相關政策的出臺，未來會有更多的具有顯著臨床效果的多肽與核酸類創新藥和仿制藥獲批上市。多肽與核酸類藥物具備無限的潛力。賽默飛TSQ Plus系列三重四極桿液質聯用儀以其出色的定量能力，能為多肽與核酸類藥物的定量檢測提供保障。下邊本作者將從多肽及核酸類藥物應用案例出發來介紹。
TSQ Quantis Plus
TSQ Altis Plus
TSQ Plus系列三重四極桿質譜
多肽藥物作為一種新興的治療手段，不僅具有高活性和強選擇性，能精準靶向疾病相關受體。而且在免疫原性方面相對較低，減少了不必要的免疫反應。司美格魯肽能夠有效控制血糖水平，抑制腸蠕動、增加飽腹感，抑制食欲。近年來成為肥胖患者的新寵。本節應用方案建立了血漿中司美格魯肽的檢測方法。
司美格魯肽4電荷態下TSQ Plus系列質譜優化界面（注意電荷量）（點擊查看大圖）
實驗中采用1:3乙腈蛋白沉淀后直接進樣的前處理方式，進樣5μL，靈敏度良好，線性1ng/mL-500ng/mL線性關系良好，兩種電荷態下司美格魯肽線性判定系數r2均在0.996以上。各校正點偏差均在10%以內。1ng/mL血漿樣品經蛋白沉淀處理后6針穩定性RSD為3.67%。
5ng/mL的實際濃度樣品4電荷下特征譜圖
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5ng/mL的實際濃度樣品3電荷下特征譜圖
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實驗中建立了LCMS聯用檢測血漿中的司美格魯肽的分析方法，LOQ實際濃度達到1ng/mL進樣5μL。
在多肽藥物發展的同時，核酸藥物的發展也備受關注。核酸類藥物從源頭干預疾病發生發展，成為近年來醫藥領域的研究熱點。本節小作者采用實際核酸樣品在TSQ Plus系列質譜上測試實驗為例來闡述。某4電荷的核酸在2ng/mL血漿中經液液萃取后，實際濃度0.4ng/mL進樣5μL，信噪比等于38.6，滿足定量需求，6針穩定性良好，RSD在4%以內。
某4電荷的核酸2ng/mL（實際濃度0.4ng/mL）血漿加標樣特征譜圖（點擊查看大圖）
核酸2ng/mL-1000ng/mL（實際濃度0.4ng/mL-200ng/mL）血漿加標樣標曲，判定系數r2=0.9993，各點偏差在10%以內。（點擊查看大圖）
多肽核酸藥物分析方法開發
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色譜方法開發注意事項：
多肽及核酸為兩性物質，極性比較大，保留相對較弱，且很容易在色譜柱殘留（用含有0.4-1%甲酸的常規洗針液洗針）；多肽及核酸的分子量比較大，因此常規用于小分子的色譜柱（孔徑120Å ) 并不適合多肽分析，需要用300Å；多肽在新的色譜柱上很容易發生吸附現象，導致峰形差，需要對色譜柱進行鈍化處理（包括在流動相中加萬分之一的血漿或者白蛋白）。
前處理注意事項：
無法像小分子,找到一種合適的前處理方法。蛋白沉淀法幾乎使得目標肽一起沉淀，特別是分子量較大時（大于一萬的將不適合蛋白沉淀的前處理）;液液萃取可能無法提取出目標肽或核酸（需要用SPE或者超濾等方式）。
多肽及核酸藥物容易發生非特異性吸附：
蛋白沉淀上清液，N2揮干造成多肽的損失；多肽及核酸標曲配制過程中的非特異性吸附（選擇合適的槍頭及容器）。
質譜SRM采集方法開發注意事項：
大多數多肽及核酸很難找到特征性的碎片離子，低能量下，沒有碎片離子生成，而高能量下又生成很多小的碎片離子；此時可以運用SRM的母離子進行定量或者SIM模式下抽提高響應電荷態離子流來進行定量。此時也同樣具備高的專屬性；多肽及核酸在進行碎裂時，往往會產生很多響應很高但特異性不好的亞銨離子，這些離子會干擾SRM抽提離子通道的選擇，盡量不選擇低于200以下的，這些離子的通道的特異性差會有較高的背景干擾。
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